桂枝茯苓胶囊出自汉代张仲景的《金匮要略》，由桂枝、茯苓、牡丹皮、桃仁和白芍组成，具有活血化瘀、散结消癥之功，主要用于治疗痛经、月经过多等症。研究表明，其主要含有没食子酸、苦杏仁苷、芍药苷、桂皮醛、肉桂酸、丹皮酚、去氢土莫酸、茯苓酸等化学成分。

采用UHPLC串联线性离子阱-静电轨道阱串联质谱（LTQ-Orbitrap-MS）技术研究原发性痛经模型大鼠灌服桂枝茯苓胶囊混悬液后体内的代谢产物，共鉴定出8个原形和50个代谢产物。

UHPLC-LTQ-Orbitrap-MS条件

采用WatersACQUITYUPLCBEHC18色谱柱（mm×2.1mm，1.7μm），以乙腈（A）-0.1%甲酸水溶液（B）为流动相，梯度洗脱（0~7min，95%A→90%A；7~12min，90%A→80%A；12~16min，80%A；16~18min，80%A→55%A；18~22min，55%A→20%A；22~25min，20%A；25~27min，20%A→0%A；27~28.5min，0%A→95%A；28.5~30min，95%A）流速0.4mL·min-1，柱温30℃，进样量2μL。

采用电喷雾离子源（ESI），正负离子扫描模式测定，扫描范围m/z50~0，采集时间为0.8~30min。主要质谱参数：毛细管温度℃，蒸发器温度℃，鞘气流40kPa，辅助气流15kPa，喷雾电压3.5V，源电流μA；MS2质谱的触发方式为动态数据依赖分析模式，选取上一级最高峰进行碰撞诱导碎裂解离碎片扫描（CID），碰撞能量设定为30%。

溶液的制备

对照品溶液

分别取没食子酸、苦杏仁苷、芍药苷、桂皮醛、肉桂酸、丹皮酚、去氢土莫酸、茯苓酸对照品适量，用甲醇溶解，制得浓度为1mg·mL-1的储备液备用。

血浆样品供试品溶液

将各个时间点的血浆样品等量混匀，再取混合血浆1mL，加入0.1%甲酸水溶液μL及3倍体积乙腈沉淀蛋白，涡旋30s混匀，离心10min（r·min-1），取上清液于37℃离心（r·min-1）浓缩至干，以μL初始流动相复溶，离心10min（r·min-1），取上清液为血浆样品供试液。

大鼠胆汁、尿液样品供试液

大鼠粪便样品供试液

取碾碎混匀的粪便0.5g，加70%甲醇溶液3mL，超声（功率W，频率40kHz）处理10min，取出后离心10min（r·min-1），取上清离心（r·min-1）浓缩至干，加入μL初始流动相复溶，涡旋5min后离心10min（r·min-1），取上清液作为粪便样品供试液。

原发性痛经模型的建立及给药

生物样品的采集

大鼠实验前禁食不禁水12h，血浆组于给药后0.5、2、4、6、8h眼眶静脉丛取血至预先涂有1%肝素钠生理盐水的EP管中，离心10min（r·min-1），取上清得血浆样品；胆汁组大鼠用10%水合氯醛麻醉，胆管插入并固定，于给药后开始收集0.5~12h胆汁样品；取尿液/粪便组大鼠分别置于代谢笼，收集0~12、12~24、24~36h的尿液样品和粪便样品。以上样品置于-80℃保存。

结果分析

血浆、胆汁、尿液、粪便UHPLC-LTQ-Orbitrap-MS分析

取模型及其给药组大鼠血浆、胆汁、尿液及粪便样品供试液，按UHPLC-LTQ-Orbitrap-MS条件进样分析。

代谢产物分析

利用Metworks1.3分析软件，对模型组及给药组的一级质谱进行自动比对，结合待测化合物元素组成、保留时间、裂解碎片及相关代谢文献，在质谱数据检测误差范围小于1×10-5的条件下，寻找符合代谢修饰的代谢产物准分子离子峰，结合二级质谱分析代谢物结构特征，并通过MassFrontier7.0谱图解析软件作进一步验证。

最终从大鼠血浆、胆汁、粪便和尿液样品中共分析鉴定出8个原型成分和50个可能的代谢产物，在体内主要发生Ⅰ相代谢反应（脱羧、水解、脱羟基和脱水等）及Ⅱ相代谢反应（甲基化、乙酰化、硫酸化及葡萄糖醛酸化等）。

本文对桂枝茯苓胶囊中主要化学成分在大鼠原发性痛经病理状态下，血浆、胆汁、尿液和粪便中的代谢进行了系统研究，鉴定出8个原形及50个代谢产物，为进一步研究该复方制剂的药物代谢动力学提供依据。